Avaliação da tendência temporal e da prevalência de leishmaniose visceral canina e humana dentre os anos de 2010 a 2019 em municípios de Minas Gerais ­ Brasil / Evaluation of the temporal trend and prevalence of canine and human visceral leishmaniosis between 2010 and 2019 in municipalities of Minas Gerais - Brazil / Evaluación de la tendencia temporal y de la prevalencia de leishmaniosis visceral canina y humana entre los años 2010 a 2019 en los municipios de Minas Gerais ­ Brasil

Leishmanioses são causadas por protozoários do gênero Leishmania, parasitos que infectam grande número de mamíferos, incluindo o homem. A Leishmaniose Visceral (LV) é a forma mais severa da doença e invariavelmente leva ao óbito, se não diagnosticada e tratada precocemente. O objetivo deste estudo foi realizar uma análise de natureza documental, descritiva e analítica, de abordagem quantitativa das informações contidas no banco de dados Fundação Ezequiel Dias/Gerenciador de Ambientes Laboratoriais (FUNED/GAL), da Secretaria Estadual de Saúde de Minas Gerais. Os dados epidemiológicos que compõe este estudo são registros de casos positivos e negativos da cidade de Patos de Minas-MG e 18 municípios das mesorregiões do Triângulo Mineiro e Alto Paranaíba, Noroeste de Minas e Norte de Minas. No período compreendido entre janeiro de 2010 e junho de 2019 foram notificados um total de 1170 indivíduos suspeitos de Leishmaniose Visceral Canina e/ou Humana. 304 (25,98%) indivíduos receberam o resultado positivo, enquanto 866 foram negativos, e em alguns casos, inconclusivos. Os dados obtidos no estudo revelaram a tendência temporal crescente e alta prevalência da doença, mostrando que a doença está em expansão na região estudada onde o cão é o principal reservatório doméstico da doença, permanecendo como principal elo de ligação entre o protozoário e o hospedeiro humano.(AU)

Leishmaniasis are caused by protozoa of the genus Leishmania, parasites that infect a large number of mammals, including humans. Visceral Leishmaniasis (VL) is the most severe form of the disease and invariably leads to death if not diagnosed and treated early. The objective of this study was to carry out a documentary, descriptive and analytical analysis, with a quantitative approach to the information contained in the Fundação Ezequiel Dias/Manager of Laboratory Environments (FUNED/GAL) database from the Minas Gerais State Health Secretariat. The epidemiological data that make up this study are records of positive and negative cases in the city of Patos de Minas - MG and of 18 municipalities in the mesoregions of the Triângulo Mineiro and Alto Paranaíba, Northwest of Minas and North of Minas. In the period between January 2010 and June 2019, a total of 1170 individuals suspected of Canine and/or Human Visceral Leishmaniasis were notified. A total of 304 (25.98%) individuals received a positive result, while 866 were considered negative, and in some cases, inconclusive. The data obtained in the study revealed the growing temporal trend and high prevalence of the disease, showing that the disease is expanding in the studied region where the dog is presented as the main domestic reservoir of the disease, remaining as the main link between the protozoan and the human host.(AU)

Leishmaniosis son causadas por protozoos del género Leishmania, parásitos que infectan a un gran número de mamíferos, incluyendo el hombre. La Leishmaniosis Visceral (LV) es la forma más grave de la enfermedad e invariablemente conduce a la muerte, si no se la diagnostica y la trata a tiempo. El objetivo de ese estudio fue realizar un análisis de naturaleza documental, descriptivo y analítico, de enfoque cuantitativo de las informaciones contenidas en la base de datos Fundação Ezequiel Dias/Gerente de Ambientes de Laboratorio (FUNED /GAL), de la Secretaría de Salud del Estado de Minas Gerais. Los datos epidemiológicos que conforman este estudio son registros de casos positivos y negativos en la ciudad de Patos de Minas-MG y 18 municipios de las mesorregiones del Triângulo Mineiro y Alto Paranaíba, Noroeste de Minas y Norte de Minas. En el período comprendido entre enero de 2010 y junio de 2019, se notificó a un total de 1170 personas sospechosas de Leishmaniosis Visceral Canina y/o Humana. 304 (25,98%) individuos recibieron un resultado positivo, mientras que 866 fueron negativos y, en algunos casos, no concluyentes. Los datos obtenidos en el estudio revelaron la tendencia creciente temporal y la alta prevalencia de la enfermedad, mostrando que la enfermedad se está expandiendo en la región estudiada donde el perro es el principal reservorio doméstico de la enfermedad, permaneciendo como principal conexión entre el protozoo y el hospedero humano.(AU)

Alterations induced in the ileum of mice upon inoculation with different species of Leishmania: a preliminary study

Abstract INTRODUCTION: Leishmania species cause skin, mucosal, and disseminated lesions. We studied the effects of three Leishmania species on ileal morphology in mice. METHODS: BALB/c mice were intraperitoneally inoculated with Leishmania (Leishmania) amazonensis, Leishmania (Viannia) braziliensis, and Leishmania (Leishmania) major (4 animals/group). After 72h, the ilea were collected and histologically processed. RESULTS: Following inoculation, the goblet cell and intraepithelial lymphocyte populations increased, while Paneth cell number and crypt width decreased. In addition, enterocyte size, villi height, and mucosa, submucosa, and muscular tunic thickness increased. CONCLUSIONS: Leishmania modified the quantity of cells in and morphology of mice ilea.

Avaliação dos indicadores de lesão miocárdica em cães com leishmaniose visceral / Changes in myocardial injury indicators in naturally infected dogs with visceral leishmaniasis

O objetivo deste estudo foi avaliar os indicadores laboratoriais, eletrocardiográficos e histológicos de lesão cardíaca em diferentes grupos clínicos de cães com leishmaniose visceral. Foram analisados marcadores séricos, traçado eletrocardiográfico e fragmentos de tecido cardíaco de 41 cães naturalmente infectados, distribuídos em três grupos: assintomático, oligossintomático e sintomático. Todos os animais apresentaram aumento na atividade sérica da enzima creatina quinase fração MB. No traçado eletrocardiográfico, o complexo de baixa voltagem foi o distúrbio de condução mais frequente (8/10). Na análise histológica, 75,6% dos cães apresentaram reação inflamatória com predomínio de infiltrados linfo-histiocítico (13/31) de intensidade discreta a moderada e distribuição multifocal. As alterações microscópicas identificadas no miocárdio foram independentes dos achados laboratoriais, eletrocardiográficos e do quadro clínico apresentado pelos animais estudados. A ausência de associação entre alterações histopatológicas e os parâmetros investigados alerta para a dificuldade de identificação de cardiopatia em cães com leishmaniose visceral e ressalta a importância de incluir a leishmaniose visceral no diagnóstico de patologias cardíacas principalmente em regiões endêmicas para o agente.

The aim of this study was to evaluate the laboratory indicators, electrocardiographic and cardiac histological lesions in different clinical groups of dogs with visceral leishmaniasis. Serum markers were analyzed in conjunction with the electrocardiographic tracing and heart tissue fragments of 41 naturally infected dogs which were divided into three groups: asymptomatic, oligosymptomatic and symptomatic. All animals showed increased activity in serum creatine kinase MB fraction. In the electrocardiographic tracing, low voltage complex was the most frequent conduction disorder (8/12). In the histological analysis, 75.6% of the dogs showed inflammatory reaction with predominance of linfohistiocítico infiltrates (13/31) of mild to moderate intensity and multifocal distribution. Microscopic changes identified in the myocardium were independent laboratory findings, an electrocardiographic and clinical picture presented by the studied animals. The lack of association between histopathological changes and the parameters investigated indicate the difficulty in disease identification in dogs with visceral leishmaniasis and highlights the importance of including visceral leishmaniasis in the diagnosis of heart disease especially in endemic regions to the agent.

Infecção por leishmania modula a ativação de Beta-1 integrinas e altera a cinética do espalhamento celular de monócitos sobre fibronectina/Leishmania infection modulates the activation of Beta-1 integrins and alters the kinetics of monocyte cell spread on fibronectin / Leishmania infection modulates the activation of beta-1 integrins and alters the kinetics of monocyte cell spread on fibronectin / Leishmania infection modulates the activation of beta-1 integrins and alters the kinetics of monocyte cell spread on fibronectin

A leishmaniose é considerada como um grupo de doenças, causadas por parasitos do gênero Leishmania. O gênero inclui mais de 20 espécies de parasitos que são transmitidas ao homem pela picada da fêmea, infectada, dos insetos da família dos flebotomíneos e as diferentes espécies estão associadas a diferentes manifestações clínicas da doença. Uma característica marcante na infecção é a presença de macrófagos infectados no sítio de inoculação do parasito e em órgãos internos do hospedeiro. Estudos prévios, demonstraram que a infecção de fagócitos mononucleares com Leishmania amazonensis, L. infantum ou L. braziliensis promove uma diminuição na adesão celular ao tecido conjuntivo inflamado da pele. Esta diminuição da adesão é decorrente, principalmente, de mecanismos envolvidos na regulação da molécula VLA-4, uma integrina da família beta 1 que se liga à VCAM-1...

Leishmaniasis is considered a group of diseases, caused by parasites of the genus Leishmania. The genus includes more than 20 species of parasites that are transmitted to humans by the bite of vector female insect, of the phlebotomine family, and the different species are associated with different clinical manifestations of the disease. A striking feature of infection is the presence of infected macrophages at the site of inoculation of the parasite and internal organs of the host. Previous studies have demonstrated that infection of mononuclear phagocytes with Leishmania amazonensis, L. infantum or L. braziliensis promotes a decrease in cellular adhesion to the inflamed connective tissue of the skin. This decrease in adhesion results mainly from mechanisms involved in the regulation of the VLA-4 molecule, a beta 1 integrin that binds to VCAM-1...

Avaliação do papel do ferro e de proteínas envolvidas em seu metabolismo na infecção in vitro de macrófagos por Leishmania amazonenses ou Leishmania major / Iron paper and evaluation of proteins involved in the metabolism of macrophages in vitro infection by Leishmania amazonenses or Leishmania major

A leishmaniose é uma antropozoonose causada por protozoários do gênero Leishmania e é considerada uma das principais doenças negligenciadas. Modelos experimentais são amplamente utilizados para uma melhor compreensão da doença e dos mecanismos relacionados à resistência e susceptibilidade à infecção. Macrófagos de camundongos CBA controlam a infecção por Leishmania major ao passo que são permissivos a Leishmania amazonensis. Além disso, estudos baseados em abordagem proteômica demonstraram padrões distintos de expressão proteica em macrófagos derivados de medula óssea (BMMΦ) infectados por essas espécies de Leishmania. Dentre as proteínas diferentemente expressas, foram identificadas proteínas envolvidas no metabolismo de ferro moduladas positivamente em macrófagos infectados por L. amazonensis. Adicionalmente, embora ainda existam controvérsias, diversos estudos têm abordado a participação do elemento ferro na interação parasito-hospedeiro e no estabelecimento das infecções por tripanossomatídeos, incluindo Leishmania. Assim, para melhor compreender os mecanismos envolvidos nessa doença, o presente estudo buscou explorar o modelo comparativo de resistência e suscetibilidade do camundongo CBA para determinar o papel do ferro na infecção por Leishmania. Nossa hipótese é que a expressão de proteínas envolvidas no metabolismo de ferro é modulada diferentemente em macrófagos de camundongos CBA infectados por L. amazonensis, em comparação à L. major, favorecendo a sobrevivência intracelular do parasito. Nosso objetivo foi avaliar a expressão de proteínas que participam do metabolismo de ferro, como receptor de transferrina (Tf), CD71, e heme oxigenasse-1, HO-1, e determinar o efeito da modulação da disponibilidade de ferro na infecção por Leishmania. Observamos maior expressão de HO-1 em BMMΦ infectados por L. amazonensis (18,34 ± SD ng/mL), quando comparados a BMMΦ infectados por L. major (7,07 ± SD ng/mL), utilizando ELISA. Maior expressão de CD71 também foi observada na infecção por L. amazonensis (MFI 2.103) em comparação à infecção por L. major (MFI 472), utilizando FACS, além de uma maior ligação e captação de HoloTf (Tf carregada com ferro). Embora tenha sido observado que essas proteínas encontram-se diferentemente expressas em BMMΦ infectados por essas duas espécies de Leishmania, não foram observadas diferenças significativas na concentração intracelular do ferro. Em seguida, ensaios funcionais a partir da modulação da disponibilidade intracelular de ferro foram realizados com o objetivo de avaliar seu papel no desfecho da infecção por Leishmania. Os resultados mostraram que a depleção de ferro reduz em 90% o percentual de BMMΦ infectados por L. amazonensis e 70% dos infectados por L. major...

Leishmaniasis is an anthropozoonosis caused by the protozoan parasite Leishmania and is considered one of the main neglected diseases. Animal models are widely used to better understand the disease and the mechanisms involved in resistance and susceptibility to infection. CBA mouse macrophages control the infection by L. major, while are permissive to L. amazonensis. Proteomic studies showed different protein profiles in bone marrow macrophages (BMMΦ) infected these species of Leishmania. We also observed that proteins involved in iron metabolism were positively modulated in L. amazonensis-infected macrophages. In addition, although literature review showed controverse data, several studies have addressed the role iron plays in host-parasite interaction and the establishment of trypanosomatids infections, including Leishmania. To better understand the mechanisms of the disease, this study sought to evaluate in a comparative model of resistance and susceptibility, using CBA macrophages, the role iron plays in Leishmania infection. Our hypothesis is that the expression of proteins involved in iron metabolism is differently modulated in CBA mice macrophages infected with L. amazonensis in comparison to L. major, favoring the intracellular survival of the parasite. Our goal was to evaluate the expression of proteins involved in iron metabolism of CBA mice macrophages, such as transferrin receptor (Tf), CD71, and heme oxygenase 1 (HO-1) and determine the effect of the modulation of intracellular iron in Leishmania infection. Using ELISA, we confirmed a higher expression of HO-1 in L. amazonensis- (18.34 ng/mL) compared to L. major-infected CBA macrophages (7.07 ng/mL). Using FACS analysis, CD71 showed to be higher expressed in L. amazonensis- (MFI 2.103) than in L. major-infected macrophages (MFI 472), in addition to higher binding and take up of HoloTf in these cells. Although it has been observed that proteins involved in iron metabolism were differently expressed in BMMΦ infected with these Leishmania species, no significant differences were observed in intracellular iron concentration. To further evaluate the role iron plays in the outcome of Leishmania infection, we modulated iron availability to Leishmania-infected cells using iron chelates or iron supplements. The results show that iron depletion reduces in 90% L. amazonensis infection and in 70% L. major infection. In addition, iron supplementation increased the percentage of L. amazonensis-infected cells from 69.64 to 82.79% and parasite load from 2,996 to 4,001 Leishmania/cell, as well as in the intracellular viability of both Leishmania species. In sum, these data indicate that although there is a positive modulation...

Implantação e Avaliação de Estratégia de Organização de Serviços de Saúde para Prevenção e Controle da Leishmaniose Visceral em Município daRegião Metropolitana de Belo Horizonte onde a doença é endêmica

O estudo, desenvolvido no período de 2010 a 2012, visou implantar e avaliar uma estratégia de organização de serviços de saúde para prevenção e controle da leishmaniose visceral (LV) no Município de Ribeirão das Neves - MG. A estratégia teve como eixo norteador a integração dos serviços de assistência, controle de zoonoses e epidemiologia, por meio da criação de uma equipe de coordenação (EC)e teve o técnico de enfermagem (TE) como um elo importante do trabalho. A EC participou do processo de implantação e avaliação da estratégia, que consistiu em:análise de contexto organizacional; reorganização da assistência aos casos da doença com definição de portas de entrada e divulgação de fluxogramas;reorganização da vigilância com definição de fluxos, análise e divulgação de dados;formação por meio de oficina de um TE por serviço de saúde para atuar como referência da prevenção e controle da doença; intervenção na comunidade por meio de quatro visitas domiciliares realizadas por agentes de saúde, que constaram em aplicação de questionário sobre a LV aos responsáveis pelos domicílios, inspeção sanitária e diálogo a respeito da doença com o morador.

A análise dos questionário se dos dados da inspeção sanitária foi realizada entre a primeira e última visita. Foi realizado estudo qualitativo para contribuir na compreensão da influência dos fatores de contexto na implantação da estratégia. Avaliou-se o grau de implantação da estratégia nas dimensões de estrutura e processo. Os dados foram coletados a partir da aplicação de questionários a médicos, enfermeiros, agentes de saúde e TE;grupos focais; análise de banco de dados, entre outros. Observou-se que o sistema de saúde apresentava ausência de fluxos, de protocolos, de apoio diagnóstico e equipes de saúde incompletas. Foi observado baixo conhecimento da população sobre a doença e falta de sistematização de atividades de prevenção na rotina de trabalho dos agentes de saúde. No período de estudo, houve aumento significativo de notificações de casos de LV e redução do intervalo entre a notificação do caso e início do tratamento. Na intervenção na comunidade, observou-se aumento significativo do percentual de acerto dos moradores nos questionários e melhoria da condição sanitária. O grau de implantação da estratégia mostrou-se adequado em relação à estrutura física, atuação da EC, planejamento, formação dos TEs e intervenção na comunidade, mas foi considerado crítico em relação a recursos humanos, cujos efeitos repercutem diretamente na qualidade da atenção à saúde.

Estudo da susceptibilidade de Lutzomyia ( L. ) longipalpis com diferentes espécies de Leishmania

Estudos da interação Leishmania-flebotomíneo constituem um importante campo de pesquisa,já que podem contribuir com o conhecimento dos processos envolvidos na transmissão do parasito e na epidemiologia das Leishmanioses. Diante da não existência de uma vacina efetiva contra a doença e de uma variedade limitada de drogas para o tratamento, detalhes de todos os aspectos da interação parasito-vetor são desejáveis para a formulação de novas estratégias de controle contra o protozoário e o vetor. Algumas espécies de flebotomíneos mostram notável especificidade para os parasitos de Leishmania transmitidos na natureza,enquanto outras espécies podem se infectar, experimentalmente, por mais de uma espécie de parasito. À essas últimas têm sido sugerido o termo "Vetores Permissivos”. Ainda não se sabe ao certo como funciona a interação Vetores Permissivos-Leishmania, mas acredita-se que o mecanismo de adesão do parasito ao intestino médio dos vetores permissivos seja diferente dos Vetores Naturais. O trabalho aqui apresentado descreve o desenvolvimento de quatro espécies distintas de Leishmania (Leishmania (Leishmania) major, Leishmania (Leishmania)amazonensis, Leishmania (Viannia) braziliensis e Leishmania (Leishmania) chagasi) em Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis, considerado um vetor permissivo.

Esse desenvolvimento foi acompanhado utilizando a técnica de infecção experimental com três diferentes doses de parasitos (4x107, 2x107, 1x107). Os intestinos médios dos flebotomíneos infectados foram analisados no 2º e 6º dias após a infecção experimental. O sangue ainda está presente no intestino do vetor no 2º dia após a infecção, mas se encontra totalmente digerido no 6º dia. Foi observado que após a digestão sanguínea, em todas as diferentes doses utilizadas, o inseto suporta a infecção por L. (L.) chagasi, L. (L.) major e L. (L.) amazonensis, mas não por L. (V.)braziliensis que foi capaz de se desenvolver no vetor apenas na dose mais alta (4x107), mas com uma média de infecção baixa. Leishmania (L.) amazonensis e L. (L.) major mostraram uma média de 7000 parasitos quando utilizamos a menor dose, porém não podemos afirmar que estas espécies são capazes de transmitir a doença.

Efeito imunomodulador de vesículas de membrana obtidas de macrófagosinfectados por leishmania sobre macrófagos não infectados / Immunomodulatory Effect of membrane vesicles obtained from macrophages Leishmania infection of uninfected macrophages

Vesículas de membrana (VMs) derivadas de macrófagos infectados com microorganismos intracelulares têm capacidade inflamatória. Estas vesículas podem conter antígenos do patógeno, carrear moléculas de MHC II e componentes celulares que podem atuar como PAMPs ou DAMPs induzindo resposta imune. Na infecção por Leishmania, a indução de uma resposta do tipo Th1 é crucial para promoção de proteção contra o parasito. O objetivo do trabalho foi avaliar a capacidade imunomoduladora de VMs derivadas de macrófagos infectados com L. amazonensis sobre a produção de citocinas por outros macrófagos. VMs foram visualizadas por microscopia eletrônica tanto em preparações celulares como no precipitado obtido por sucessivas centrifugações de sobrenadantes de cultivos celulares. Foi observada por citometria de fluxo a presença de marcadores celulares específicos (F4/80 e CD11b) nas VMs, bem como MHC II. O tratamento de macrófagos não infectados com VMs derivadas de macrófagos infectados com L. amazonensis ocasionou aumento consistente da produção de IL-12p70 e IL-1β. Estas vesículas poderiam, portanto, favorecer a modulação da resposta imune em favor do combate ao parasito.

Membrane vesicles (MV) derived macrophages infected with intracellular microbes are proinflammatory. These vesicles contain antigens of the pathogen, carry MHC II molecules and cellular components that can act as PAMPs or DAMPs inducing immune responses. In Leishmania infection the induction of a Th1 response is crucial for the protection against the parasite. The aim of the study was to evaluate whether vesicles derived from macrophages infected with L. amazonensis had the capacity to modulate the response of other macrophages. MV were visualized by electron microscopy in cellular preparations as well in the precipitate obtained by centrifugation of cell supernatants. Flow cytometry revealed the presence of specific cellular markers (F4/80 and CD11b) in the MV, as well as MHC II. Treatment of noninfected macrophages with MV derived from L. amazonensis-infected macrophages consistently caused increased production of IL-12p70 and IL-1β. These vesicles can favor the modulation of the immune response in favor of combating the parasite.

Vacúolos parasitóforos induzidos por Leishmania amazonensis e Leishmania major interagem de forma distintacom a via autofágica / Parasitophorous vacuoles induced byLeishmania amazonensis and Leishmania major interact differently with the autophagic pathway

A Leishmania é um parasito intracelular obrigatório que vive e se multiplic adentro dos vacúolos parasitóforos em macrófagos no hospedeiro vertebrado. Apesar dos vacúolos induzidos por diferentes espécies de Leishmania apresentarem semelhanças bioquímicas, esses compartimentos apresentam diferenças significativas nos seus tamanhos. Os vacúolos parasitóforos induzidos por Leishmania mexicana e Leishmania amazonensis apresentam grandes dimensões e contêm uma grande quantidade de amastigotas, enquanto que os induzidos por Leishmania major e Leishmania donovani são pequenos e com pouco espaço ao redor das amastigotas. Estudos recentes demonstraram que compartimentos induzidos por microrganismos intracelulares são capazes de interagir com a via autofágica e esta pode controlar ou promover o estabelecimento da infecção a depender da natureza do microrganismo. Até o momento, poucos estudos foram realizados para avaliar o papel da autofagia na biogênese e maturação dos vacúolos parasitóforos induzidos por Leishmania. Recentemente, foi demonstrado que em macrófagos de camundongos BALB/c...

Leishmania is an intracellular parasite that lives and multiplies within parasitophorous vacuoles in macrophages in the vertebrate host. Despite the fact that vacuoles induced by different species of Leishmania present biochemical similarities, these compartments have significant differences in their sizes and composition. The parasitophorous vacuoles induced by Leishmania mexicana and Leishmania amazonensis are large and contain a large number of amastigotes, while vacuoles induced by Leishmania major and Leishmania donovani are small and tight. Recent studies have demonstrated that depending on the type of intracellular microorganism, the induced compartments can interact with the autophagic pathway and control or promote the establishment of infection. To date, few studies have been conducted to evaluate the role autophagic process plays in the biogenesis and maturation of parasitophorous vacuoles induced by Leishmania. Recently, it has been demonstrated that in macrophages of BALB/c...

Implantação e Avaliação de Estratégia de Organização de Serviços de Saúde para Prevenção e Controle da Leishmaniose Visceral em Município daRegião Metropolitana de Belo Horizonte onde a doença é endêmica / Implementation and Evaluation Strategy Health Services Organization and Prevention Control of visceral leishmaniasis in the Municipality Metropolitan region of Belo Horizonte where the disease is endemic

O estudo, desenvolvido no período de 2010 a 2012, visou implantar e avaliar uma estratégia de organização de serviços de saúde para prevenção e controle da leishmaniose visceral (LV) no Município de Ribeirão das Neves - MG. A estratégia teve como eixo norteador a integração dos serviços de assistência, controle de zoonoses e epidemiologia, por meio da criação de uma equipe de coordenação (EC)e teve o técnico de enfermagem (TE) como um elo importante do trabalho. A EC participou do processo de implantação e avaliação da estratégia, que consistiu em:análise de contexto organizacional; reorganização da assistência aos casos da doença com definição de portas de entrada e divulgação de fluxogramas;reorganização da vigilância com definição de fluxos, análise e divulgação de dados;formação por meio de oficina de um TE por serviço de saúde para atuar como referência da prevenção e controle da doença; intervenção na comunidade por meio de quatro visitas domiciliares realizadas por agentes de saúde, que constaram em aplicação de questionário sobre a LV aos responsáveis pelos domicílios, inspeção sanitária e diálogo a respeito da doença com o morador...

A análise dos questionário se dos dados da inspeção sanitária foi realizada entre a primeira e última visita. Foi realizado estudo qualitativo para contribuir na compreensão da influência dos fatores de contexto na implantação da estratégia. Avaliou-se o grau de implantação da estratégia nas dimensões de estrutura e processo. Os dados foram coletados a partir da aplicação de questionários a médicos, enfermeiros, agentes de saúde e TE;grupos focais; análise de banco de dados, entre outros. Observou-se que o sistema de saúde apresentava ausência de fluxos, de protocolos, de apoio diagnóstico e equipes de saúde incompletas. Foi observado baixo conhecimento da população sobre a doença e falta de sistematização de atividades de prevenção na rotina de trabalho dos agentes de saúde. No período de estudo, houve aumento significativo de notificações de casos de LV e redução do intervalo entre a notificação do caso e início do tratamento. Na intervenção na comunidade, observou-se aumento significativo do percentual de acerto dos moradores nos questionários e melhoria da condição sanitária. O grau de implantação da estratégia mostrou-se adequado em relação à estrutura física, atuação da EC, planejamento, formação dos TEs e intervenção na comunidade, mas foi considerado crítico em relação a recursos humanos, cujos efeitos repercutem diretamente na qualidade da atenção à saúde...

Estudo da susceptibilidade de Lutzomyia ( L. ) longipalpis com diferentes espécies de Leishmania / Study susceptibility of Lutzomyia ( L. ) longipalpis with different species of Leishmania

Estudos da interação Leishmania-flebotomíneo constituem um importante campo de pesquisa,já que podem contribuir com o conhecimento dos processos envolvidos na transmissão do parasito e na epidemiologia das Leishmanioses. Diante da não existência de uma vacina efetiva contra a doença e de uma variedade limitada de drogas para o tratamento, detalhes de todos os aspectos da interação parasito-vetor são desejáveis para a formulação de novas estratégias de controle contra o protozoário e o vetor. Algumas espécies de flebotomíneos mostram notável especificidade para os parasitos de Leishmania transmitidos na natureza,enquanto outras espécies podem se infectar, experimentalmente, por mais de uma espécie de parasito. À essas últimas têm sido sugerido o termo "Vetores Permissivos”. Ainda não se sabe ao certo como funciona a interação Vetores Permissivos-Leishmania, mas acredita-se que o mecanismo de adesão do parasito ao intestino médio dos vetores permissivos seja diferente dos Vetores Naturais. O trabalho aqui apresentado descreve o desenvolvimento de quatro espécies distintas de Leishmania (Leishmania (Leishmania) major, Leishmania (Leishmania)amazonensis, Leishmania (Viannia) braziliensis e Leishmania (Leishmania) chagasi) em Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis, considerado um vetor permissivo...

Esse desenvolvimento foi acompanhado utilizando a técnica de infecção experimental com três diferentes doses de parasitos (4x107, 2x107, 1x107). Os intestinos médios dos flebotomíneos infectados foram analisados no 2º e 6º dias após a infecção experimental. O sangue ainda está presente no intestino do vetor no 2º dia após a infecção, mas se encontra totalmente digerido no 6º dia. Foi observado que após a digestão sanguínea, em todas as diferentes doses utilizadas, o inseto suporta a infecção por L. (L.) chagasi, L. (L.) major e L. (L.) amazonensis, mas não por L. (V.)braziliensis que foi capaz de se desenvolver no vetor apenas na dose mais alta (4x107), mas com uma média de infecção baixa. Leishmania (L.) amazonensis e L. (L.) major mostraram uma média de 7000 parasitos quando utilizamos a menor dose, porém não podemos afirmar que estas espécies são capazes de transmitir a doença...

Sandflies (Diptera, Psychodidae) from forest areas in Botucatu municipality, central western Sao Paulo State, Brazil

The study of the distribution and ecology of sandfly species is essential for epidemiological surveillance and estimation of the transmission risk of Leishmania spp. infection. Findings In the present study, sandflies were captured in native fragmented forest areas in Rubião Júnior district, Botucatu municipality, São Paulo state, Brazil, between September 2001 and January 2005. A minimum of two automatic light traps were installed per night from 6 pm to 8 am, in different months, resulting in approximately 900 collecting hours. During this period, 216 sandfly specimens of sixteen species were captured. Pintomyia monticola and Brumptomyia guimaraesi were the most abundant with 56 specimens (25.93%) captured per species, followed by Pintomyia fischeri 28 (12.96%) and Psathyromyia pascalei 18 (8.33%). Other captured species were Lutzomyia amarali, Sciopemyia sordellii, Psathyromyia aragaoi, Nyssomyia whitmani, Migonemyia migonei, Pintomyia bianchigalatiae, Pintomyia misionensis, Brumptomyia carvalheiroi, Brumptomyia cardosoi, Brumptomyia cunhai, Brumptomyia nitzulescui, Brumptomyia brumpti and Brumptomyia spp represented by 58 (26.85%) specimens. Conclusions Although less frequently found, the presence of Pintomyia fischeri, Nyssomyia whitmani and Migonemyia migonei, known vectors of Leishmania braziliensis, indicates risk of American cutaneous leishmaniasis occurrence. Moreover, the absence of Lutzomyia longipalpis -the main vector of Leishmania infantum chagasi, which is the agent of American visceral leishmaniasis-suggests that there.

American tegumentary leishmaniasis: an uncommon clinical and histopathological presentation / Leishmaniose tegumentar americana: uma apresentação clínica e histopatológica incomum

We report a case of an unusual presentation of American Tegumentary Leishmaniasis involving a male patient with a solitary lesion on the ear lobe, persisting with minimal increase for at least six months without ulceration or related symptoms. The histological sections showed epithelial atrophy and a large number of structures consistent with Leishmania sp. amastigotes within macrophages. Treatment commenced with meglumine antimoniate resulting in regression of the condition. This report is of importance given the unusual clinical manifestation and histopathological findings in this case and the fact that there was low correlation with the extended duration of the disease.

Relatamos um caso de apresentação incomum de leishmaniose tegumentar americana com lesão solitária no lóbulo da orelha de um paciente do sexo masculino com mínimo aumento em, pelo menos, seis meses, sem ulceração ou sintomas relacionados. Os cortes histológicos mostraram atrofia epitelial e um grande número de estruturas compatíveis com amastigotas de Leishmania sp. no interior de macrófagos. O tratamento foi iniciado com antimoniato de meglumina, com regressão do quadro. A importância desse relato de caso é devido à apresentação clínica e histopatológica atípica e sua baixa correlação com a duração prolongada da doença.

Duração da imunidade vacinal na Leishmaniose visceral: padrão de citocinas sintetizadas por Leucócitos circulantes após estímulo in vitro com antígeno solúvel de Leishmania chagasi

A leishmaniose visceral é endêmica em muitas regiões do Brasil e é uma importante doença infecto-parasitária causada por protozoários. Além dos seres humanos, os cães também são seriamente acometidos e, no meio urbano, são considerados os principais reservatórios da doença. Esta espécie animal caracteriza-se como fonte de transmissão eficaz por coabitar com as pessoas e, muitas vezes, apresentar altas taxas de infecção sem ter um quadro clínico aparente. A atual estratégia para o controle desta doença é baseada na eliminação de cães soropositivos, tratamento sistemático dos casos humanos e o controle vetorial. Embora a eutanásia do cão seja a principal estratégia de controle da doença, não é amplamente aceita, especialmente por parte dos proprietários. Contudo, as estratégias terapêuticas mais estudadas em cães não conseguiram alcançar a cura parasitológica consistente em CVL. Neste contexto, o desenvolvimento de uma vacina protetora contra CVL poderia ser uma ferramenta promissora para o controle de CVL e consequentemente para Leishmaniose visceral humana. Normalmente, há um consenso de que o microambiente citocina desempenha um papel central no resultado da patogênese da leishmaniose. O principal mecanismo efetor envolvido na resposta imunoprotetora em cães infectados com Leishmania é a ativação dos macrófagos pelo IFN- g, levando-o a eliminar a forma amastigota intracelular mediada pela produção de óxido nítrico

O objetivo do nosso estudo foi avaliar o perfil de citocinas em cães, em diferentes tempos pós vacinação com Leishmune ®, após estímulo in vitro com antígeno solúvel de Leishmania chagasi. Empregamos citometria de fluxo e ELISA para análise da produção de citocinas intracelular e secretadas, respectivamente. Os nossos resultados mostraram que a Leishmune ® foi capaz de induzir um aumento do nível de produção de IL-8 e IFN-g, IL-17a e TNF-α e redução de IL-10 no primeiro e sexto mês após a vacinação, e também redução de IL-4 seis meses após vacinação. No grupo de cães com um ano após vacinação, não foi encontrada nenhuma alteração significativa em relação ao perfil de citocinas do grupo de cães não vacinados. As alterações imunológicas acima citadas, levam-nos a acreditar que o processo vacinal promove o desenvolvimento de um perfil de resposta imune celular capaz de induzir imunoproteção aos cães vacinados, ou seja, o animal desenvolve mecanismos imunobiológicos supostamente efetivos contra infecção. Portanto, fica claro que estas alterações permanecem até 6 meses, sendo que após 1 ano da vacinação os animais retornam à um perfil de biomarcadores basal, o que sugere a necessidade do reforço vacinal neste período ou até mesmo anterior a ele

Estudo comparativo entre o antimoniato-n-metilglucamina (glucantime) e o isotionato de pentamidina (pentacarinat) em lesões cutâneas da leishmaniose tegumentar / Comparative study of antimony-n-methylglucamine (glucantime) and pentamidine isethionate (Pentacarinat) in skin lesions of cutaneous leishmaniasis

O prognóstico da leishmaniose cutânea (LC) com o uso dos antimoniais pentavalentes (Sb+5) de um modo geral é considerado bom, embora alguns casos tornem-se refratários à terapêutica tradicional. Infelizmente, não existem marcadores de gravidade da doença ou marcadores de resposta terapêutica, limitando a utilização de formas de tratamento mais efetivas. Em alguns casos, porém, existe a necessidade de utilizar outras drogas, como a anfotericina B (desoxocolato) e as pentamidinas (isotionato e mesilato), consideradas como drogas de 2ª escolha no tratamento das leishmanioses, sendo de fundamental importância à busca de novos esquemas terapêuticos. O objetivo do estudo foi comparar a eficácia entre o antimoniato-N-metilglucamina (Glucantime®) e o isotionato de pentamidina (Pentacarinat®) no tratamento da forma cutânea da leishmaniose tegumentar (LT)...

The prognosis of cutaneous leishmaniasis (CL) with the use of pentavalents antimonials (Sb+5) is generally considered good, although in some cases have become refractory to conventional therapy. Unfortunately there are no markers of disease severity or markers of therapeutic response, limiting the use of more effective forms of treatment. In some cases, however, there is a need for other drugs such as amphotericin B (desoxycholate) and pentamidine (isethionate and mesylate), which are considered as the second choice in the treatment of leishmaniasis, since few studies with reduced doses of these drugs demonstrated encouraging results in tegumentary leishmaniasis (TL), which is paramount in the search for new therapeutic regimens using proven antileishmanial drugs. We have compared the effectiveness between the N-methylglucamine antimoniate (Glucantime®) and pentamidine isethionate (Pentacarinat®) in the treatment of CL in an endemic area of tegumentary leishmaniasis (TL)...

Desenvolvimento de plasmídio para expressão protéica dependente da fase do ciclo de vida em Leishmania / Development of plasmid for protein expression dependent on the stage of the life cycle in Leishmania

Protozoários do gênero Leishmania provocam uma ampla gama de doenças, e passam por um processo de diferenciação entre o inseto vetor e a forma intracelular no hospedeiro mamífero. Apesar das diferenças entre as formas do ciclo de vida, não estava descrita ferramenta para expressar proteínas de modo estágio específico. Neste trabalho apresentamos um plasmídio para Leishmania que expressa proteína recombinante de forma estágio específica. Testamos uma possível construção que usava as região 3’ UTR do gene amastina para controlar a expressão de uma proteína fluorescente e a expressar exclusivamente na fase amastigota. Também utilizamos a região 3’ UTR de uma tubulina para obter uma fluorescência homogênea em todos os estágios do ciclo de vida do parasita. Assim como esperado, obtivemos uma fluorescência exclusiva para a fase amastigota quando utilizamos a região 3’ UTR da amastina, e uma fluorescência constitutiva quando a expressão foi regulada pela região 3’ UTR da tubulina. O plasmídio descrito neste trabalho é versátil, pois a droga de seleção ou a proteína a ser expressa podem ser substituídas com grande facilidade. Adicionalmente, como o plasmídio pFL expressou um gene repórter exclusivamente no estágio amastigota ou constitutivamente, acreditamos que este plasmídio pode também ser utilizado para expressar proteínas de forma restrita aos estágios promastigota metacíclico e procíclico. Alguns possíveis usos desta nova ferramenta também são discutidos nesta tese.

Corpúsculos lipídicos e eicosanoides nos momentos iniciais da infecção com leishmania infantum chagasi / Eicosanoids and lipid bodies in the early stages of infection with Leishmania infantum chagasi

Corpúsculos lipídicos são organelas citoplasmáticas envolvidas na produção de eicosanoides em leucócitos. Eicosanoides como as prostaglandinas têm sido envolvidos no controle da resposta inflamatória e imunológica. A saliva de Lutzomyia longipalpis participa do estabelecimento e desenvolvimento da doença pela modulação das respostas hemostática, imunológica e inflamatória do hospedeiro favorecendo a infecção. Entretanto, o papel dos eicosanoides nos momentos iniciais da infecção por Leishmania ainda não foi esclarecido, assim como a participação da saliva neste contexto. Aqui, nós investigamos o papel dos eicosanoides induzidos pela saliva de L. longipalpis e produzidos pela Leishmania infantum chagasi na infecção. O sonicado de glândula salivar (SGS) de L. longipalis induziu um aumento no número de CLs em macrófagos de maneira dose e tempo dependente, o qual esteve correlacionado com o aumento de PGE2 nos sobrenadante de cultura. As enzimas COX-2 e PGE- intase foram co-localizadas nos CLs induzidos pela saliva e a produção de PGE2 foi reduzida pelo tratamento com NS-398, um inibidor de COX-2. Nós verificamos que o SGS rapidamente estimulou a fosforilação de ERK-1/2 e PKC-α e a inibição farmacológica dessas vias inibiu a produção de PGE2 pelos macrófagos estimulados com SGS. Em seguida, nós avaliamos o efeito da saliva de L. longipalpis sobre a produção de eicosanoides durante a infecção por L. i. chagasi no modelo peritoneal murino. Nós observamos que a saliva aumentou a viabilidade intracelular de L. i. chagasi tanto em neutrófilos como em neutrófilos recrutados para a cavidade peritoneal. As células recrutadas para cavidade peritoneal apresentaram maiores níveis da relação PGE2/LTB4 e o pré-tratamento com NS-398 reverteu o efeito da saliva sobre a viabilidade intracelular dos parasitas. Parasitas como Leishmania são capazes de produzir PGs utilizando uma maquinaria enzimática própria. Neste estudo nós descrevemos a dinâmica de formação e a distribuição celular dos CLs em L. i. chagasi bem como a participação desta organela na produção de PGs. A quantidade de CLs aumentou durante a metaciclogênese assim como a expressão de PGF2α sintase (PGFS), sendo esta enzima co-localizada nos CLs. A adição de ácido araquidônico AA à cultura de L. i. chagasi aumentou a quantidade de CLs por parasita, bem como a secreção de PGF2α. A infecção com as diferentes formas de L. i. chagasi não foi capaz de estimular a formação de CLs na célula hospedeira. Por outro lado, os parasitas intracelulares apresentaram maiores quantidades de CLs. A infecção estimulou uma rápida expressão de COX-2, mas não foi detectado aumento na produção de PGF2α nos sobrenadantes. Por fim, nós verificamos a presença do receptor de PGF2α (FP) nos vacúolos parasitóforos de macrófagos infectados com L. i. chagasi. O prétratamento das células com um antagonista do receptor FP inibiu os índices de infecção de forma dose-dependente. Em conjunto, nossos dados apontam que os eicosanoides desempenham um papel crucial para evasão da resposta imune durante os momentos iniciais da infecção por L. i. chagasi com diferentes contribuições do parasita, do vetor e da célula hospedeira neste contexto.

Diffuse Cutaneous Leishmaniasis (LCD) is a rare clinical manifestation of Leishmaniasis, characterized by a number of macrophages heavily parasitized and low inflammatory reaction. In Brazil, Leishmania (Leishmania) amazonensis is the main specie involved in LCD cases. It has been described that the exposure and recognition of phosphatidylserine (PS) on the surface of apoptotic cells phagocytosed by macrophages is a macrophage deactivation mechanism dependent on TGF-pi and PGE2 (Fadok et al. 1998). Morover, it was demonstrated by Barcinski and colleagues that L. amazonensis amastigotes expose PS on its surface, in a mechanism called ’’Apoptotic Mimicry." In this context, our goal was to investigate the exposure of PS on the surface of L. amazonensis isolates obtained from LCD patients and its role during the infection of macrophages. Initially, peritoneal macrophages from FI mice (BALB/c x C57BL/6) stimulated with thioglycolate were infected with different L. amazonensis strains isolated from patients with Localized Cutaneous Leishmaniasis (LCL) or LCD. The exposure of PS on the surface of amastigotes was determined by flow cytometry using staining to annexin V and propidium iodide. Isolates from LCD patients showed higher PS exposure than the isolates from LCL patients 24 hours after infection. Then, we evaluated whether the differences of PS exposure in amastigotes would correlate with the infectivity of different isolates. Percentage of infected macrophages and infection index were higher in cultures using amastigotes from LCD patients compared to the ones infected with amastigotes from LCL cases. Furthermore, cultures infected with LCD isolates showed no difference to the LCL isolates regarding TGF>pl and nitric oxide production, suggesting that other immuneregulatory mechanisms are involved in this process...

Avaliação dos mecanismos de controle da infecção por leishmania amazonensis em neutrófilos humanos: o papel do LTB4 / Evaluation of mechanisms controlling the infection by Leishmania amazonensis in human neutrophils: the role of LTB4

Transmitidas por diferentes espécies de Flebótomos, as Leishmanioses apresentam uma grande variedade de manifestações clínicas. Tem sido demonstrada, a possibilidade de imunização contra a infecção por Leishmania utilizando-se a saliva do vetor Flebotomíneo Lutzomyia Longipalpis. O proncipal vetor da Leishmania Braziliensis é o Flebótomo Lutzomyia Intermedia. O objetivo deste estudo foi avaliar se a imunização de hamsters com a saliva de L. Longipalpis confere proteção contra a infecção por L. Braziliensis na presença da saliva de L. Intermedia. Hamsters machos forma imunizados com o Sonicado de Glândula Salivar (SGS) por três vezes com intervalo de quinze dias. O desafio foi feito na orelha contra-lateral quinze dias após a última imunização 105(com dez elevado à quinta potência) formas promastigotas de L. Braziliensis na presença do SGS de L. Intermedia. O desenvolvimento da lesão foi acompanhado semanalmente e 3,5 e oito semanas, após o desafio, as orelhas e lifondos drenantes foram retirados para a avaliação da carga parasitária, bem como da produção de citocinas durante a infecção. Quarenta e oito horas após o desafio com SGS, observa-se um infiltrado inflamatório composto predominantemente de células mononucleares nas orelhas dos animais imunizados. Estes animais apresentam redução significativa na carga parasitária dos lifondos drenantes, bem como das orelhas desafiadas. Além disso, produzem significativamente mais anticorpos anti-saliva quando comparados aos não-imunizados e menos anticorpos anti-Leishmania. Os possíveis mecanismos envolvidos nesta proteção são os níveis reduzidos da expressão de IL-10 e TGF- ao longo da infecção. Estes resultados sugerem que a imunização com o SGS de L. Longipalpis confere proteção contra a infecção por L. Braziliensis de modo inespecífico à presença da saliva no momento do desafio. Dessa forma, a possibilidade de vacinação contra diferentes espécies de Leishmania, utilizando proteínas salivares de uma espécie de vetor.

Avaliação das histonas de L. infantum como candidatos à vacinas na infecção por l.infantum em hamsters / Evaluation of histones from L. infantum as candidate vaccines in infection in hamsters l.infantum

A leishmaniose visceral é uma doença infecciosa grave, causada por protozoários intracelulares obrigatórios do gênero Leishmania. Vários antígenos de Leishmania têm sido avaliados como candidatos vacinais, destacando-se as proteínas de histonas (HIS), antígenos altamente conservados. A exposição de HIS pela Leishmania induz uma resposta imune potente no hospedeiro vertebrado. Desse modo, neste estudo, avaliamos, em hamsters, a capacidade imunoprotetora dos antígenos de histonas contra a infecção por Leishmania infantum. Os animais foram vacinados com estratégia homóloga, utilizando-se plasmídeos de DNA que codificam para HIS (pcDNA3LiH2A-H3, pcDNA3LiH2B-H4) ou heteróloga (DNA/proteínas HIS) mais 1nM de CpG. Quinze dias após a última imunização, os animais foram desafiados pela via intradérmica com 105 Leishmania infantum metacíclicas mais 0,5 par de glândula salivar de Lutzomya longipalpis. Após a última imunização e durante a infecção, realizaram-se dosagens de citocinas por PCR em tempo real (linfonodo e baço), sorologia por ELISA (soro), carga parasitária por diluição limitante e análise histopatológica de tecidos (linfonodo, baço e fígado). Detectou-se produção de anticorpos IgG anti HIS nos grupos imunizados com a estratégia homóloga e heteróloga, quando comparados aos hamsters não imunizados. As imunizações homóloga e heteróloga diferiram na razão IFN-γ/IL-10 no linfonodo em relação ao grupo controle. Não houve diferença significativa na expressão dessas citocinas no baço após a imunização, entretanto, cinco meses após o desafio o grupo homólogo apresentou um aumento na produção de IL-10 nesse órgão. Na análise histopatológica do baço, verificou-se formação de mais folículos com centro germinativo, evidentes nos animais imunizados independentemente do grupo analisado. Observou-se, também, leucocitose intrasinusoidal e periportal no fígado, e folículos reativos no linfonodo. Nenhuma das estratégias de imunizações com antígenos de histonas acarretou em diminuição da carga parasitária no linfonodo, baço e fígado. As estratégias de imunização homóloga e heteróloga, com antígenos de histonas nucleossomais, não foram capazes de proteger contra infecção por L. infantum no modelo do hamster.

Duração da imunidade vacinal na Leishmaniose visceral: padrão de citocinas sintetizadas por Leucócitos circulantes após estímulo in vitro com antígeno solúvel de Leishmania chagasi / Duration of immunity in leishmaniasis vaccine visceral: cytokines synthesized by standard Circulating leukocytes after in vitro stimulation with soluble antigen of Leishmania chagasi

A leishmaniose visceral é endêmica em muitas regiões do Brasil e é uma importante doença infecto-parasitária causada por protozoários. Além dos seres humanos, os cães também são seriamente acometidos e, no meio urbano, são considerados os principais reservatórios da doença. Esta espécie animal caracteriza-se como fonte de transmissão eficaz por coabitar com as pessoas e, muitas vezes, apresentar altas taxas de infecção sem ter um quadro clínico aparente. A atual estratégia para o controle desta doença é baseada na eliminação de cães soropositivos, tratamento sistemático dos casos humanos e o controle vetorial. Embora a eutanásia do cão seja a principal estratégia de controle da doença, não é amplamente aceita, especialmente por parte dos proprietários. Contudo, as estratégias terapêuticas mais estudadas em cães não conseguiram alcançar a cura parasitológica consistente em CVL. Neste contexto, o desenvolvimento de uma vacina protetora contra CVL poderia ser uma ferramenta promissora para o controle de CVL e consequentemente para Leishmaniose visceral humana. Normalmente, há um consenso de que o microambiente citocina desempenha um papel central no resultado da patogênese da leishmaniose. O principal mecanismo efetor envolvido na resposta imunoprotetora em cães infectados com Leishmania é a ativação dos macrófagos pelo IFN- g, levando-o a eliminar a forma amastigota intracelular mediada pela produção de óxido nítrico. O objetivo do nosso estudo foi avaliar o perfil de citocinas em cães, em diferentes tempos pós vacinação com Leishmune ®, após estímulo in vitro com antígeno solúvel de Leishmania chagasi. Empregamos citometria de fluxo e ELISA para análise da produção de citocinas intracelular e secretadas, respectivamente. Os nossos resultados mostraram que a Leishmune ® foi capaz de induzir um aumento do nível de produção de IL-8 e IFN-g, IL-17a e TNF-α e redução de IL-10 no primeiro e sexto mês após a vacinação, e também redução de IL-4 seis meses após vacinação. No grupo de cães com um ano após vacinação, não foi encontrada nenhuma alteração significativa em relação ao perfil de citocinas do grupo de cães não vacinados. As alterações imunológicas acima citadas, levam-nos a acreditar que o processo vacinal promove o desenvolvimento de um perfil de resposta imune celular capaz de induzir imunoproteção aos cães vacinados, ou seja, o animal desenvolve mecanismos imunobiológicos supostamente efetivos contra infecção. Portanto, fica claro que estas alterações permanecem até 6 meses, sendo que após 1 ano da vacinação os animais retornam à um perfil de biomarcadores basal, o que sugere a necessidade do reforço vacinal neste período ou até mesmo anterior a ele.